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新生鼠原代肺泡Ⅱ型上皮細胞的分離、純化與鑒定
張夢穎; 郭瑞敏; 孫燕妮 上海中醫藥大學附屬普陀醫院中心實驗室; 上海200062
關鍵詞：肺泡二型上皮細胞 原代分離 純化 原代培養 新生鼠
摘要：目的從新生SD大鼠體內分離提取肺泡Ⅱ型上皮細胞,為肺部相關疾病提供體外模型方法胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ消化分離細胞,差速貼壁法和大鼠IgG免疫黏附法純化。采用倒置顯微鏡、透射電鏡、共聚焦顯微鏡以及BCIP/NBT堿性磷酸試劑盒對細胞進行觀察和鑒定。結果采取胰蛋白酶、膠原酶消化得到細胞,活力為(94.82±1.64)%,純度為(95.96±0.90)%。倒置顯微鏡觀察細胞內呈立方形,島狀生長,胞漿內有黑色顆粒;透射電鏡下觀察到特異性板層小體;共聚焦顯微鏡下可看到表面活性蛋白C表達;BCIP/NBT堿性磷酸試劑盒鑒定后可觀察到細胞胞漿內有深藍色顆粒。結論用胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ消化可得到高純度的肺泡Ⅱ型上皮細胞,可滿足體外實驗的需要。
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