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外胚葉發育不全基因及其受體在斑馬魚牙齒早期發育中的表達
關鍵詞：外胚葉發育不全 外胚葉發育不全受體 牙齒發育 斑馬魚 原位雜交
摘要：目的探討外胚葉發育不全(EDA)基因及其受體(EDAR)基因在斑馬魚早期咽齒發育過程中的表達模式,為進一步研究其在牙齒發育過程中的功能奠定基礎。方法提取受精后48 h(48 hpf)的斑馬魚胚胎總RNA,之后逆轉錄合成cDNA,以該cDNA為模板,特異性擴增斑馬魚咽齒特異性標記基因dlx2b、Eda信號通路相關基因eda及edar基因片段,用TA克隆試劑盒將這3個基因片段分別連接到pGEMT載體上,將對應質粒用聚合酶鏈反應(PCR)線性化,以PCR線性化做模板,選擇相應的RNA聚合酶體外轉錄,合成dlx2b、eda及edar基因的反義mRNA探針。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑馬魚胚胎,運用全胚原位雜交技術檢測eda及edar基因在斑馬魚咽齒發育部位的表達分布。比較原位雜交結果eda及edar表達區域與斑馬魚咽齒特異性標記基因dlx2b所指示咽齒部位的關系。結果獲得了dlx2b、eda及edar基因的反義m RNA探針。原位雜交結果顯示,48~72 hpf時eda及edar在鰓弓牙齒相應部位可見強棕褐色陽性信號,與dlx2b所指示咽齒部位吻合。結論Eda信號通路配體與受體在斑馬魚咽齒早期發育過程中即牙齒發生至形態發生階段于咽齒部位特異性強表達,這一結果顯示該信號通路可能參與斑馬魚咽齒早期發育的調控。
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