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核仁磷酸蛋白基因NPM1敲除人宮頸癌細胞株的構建及功能
關鍵詞：核仁磷酸蛋白1 人類宮頸癌細胞 基因敲除 細胞增殖
摘要：目的通過CRISPR/Cas9系統定向敲除人類宮頸癌細胞(HELA)的核仁磷酸蛋白1基因(nucleophosmin1,NPM1),探討敲除對HELA細胞生物學行為的影響。方法利用crispr.mit.edusgRNA在線設計工具設計sgRNA,通過T7E1系統篩選合適的sgRNA,將設計好的質粒通過轉染的方式轉入HELA細胞株,通過博來霉素(zeocin)抗生素進行篩選,通過Westernblot,PCR,基因測序等手段確認敲除細胞系的建立,通過免疫熒光的方式觀察敲除細胞株。結果T7E1酶切PCR退火產物之后瓊脂糖凝膠結果表明,CRISPR/Cas9系統對HELA細胞基因組進行了切割,并在同源重組時發生了堿基錯配;Westernblot結果說明基因敲除后NPM1蛋白表達消失;基因測序的結果表明敲除細胞系建立的成功;免疫熒光的結果表明該細胞系出現異常核仁現象。結論NPM1敲除后細胞核仁異常,可能影響細胞正常生命進程。
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