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基于熒光素酶報告基因的細(xì)菌外膜囊泡標(biāo)記方法的建立

劉暢; 李楚楚; 李智洋 南京鼓樓醫(yī)院檢驗科; 南京210008; 江蘇省疾病預(yù)防控制中心急性傳染病防制所; 南京210009

關(guān)鍵詞:細(xì)菌外膜囊泡 外膜蛋白 熒光素酶 

摘要:目的建立一種基于熒光素酶報告基因的細(xì)菌外膜囊泡標(biāo)記方法。方法利用細(xì)菌外膜囊泡表面攜帶高豐度細(xì)菌外膜蛋白A(OmpA)的特點,構(gòu)建OmpA-NanoLuc熒光素酶融合蛋白,根據(jù)熒光素酶活性評估樣品中的細(xì)菌外膜囊泡數(shù)量。結(jié)果成功構(gòu)建OmpA-NanoLuc融合蛋白表達(dá)載體,受試菌株在表達(dá)該融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有穩(wěn)定的熒光素酶活性。可通過檢測熒光素酶活性的方式對細(xì)菌外膜囊泡進(jìn)行半定量檢測。結(jié)論建立了一種基于熒光素酶標(biāo)記的細(xì)菌外膜囊泡半定量檢測方法,可用于評估特定菌株的細(xì)胞外膜囊泡分泌水平。

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