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產堿桿菌Alcaligenes sp.P156中龍膽酸1,2-雙加氧酶GdoP的研究
胡春輝; 王菲; 郭立忠; 于浩 青島農業大學中心實驗室; 山東青島266109; 青島農業大學生命科學學院/山東省應用真菌重點實驗室; 山東青島266109
關鍵詞：龍膽酸1 產堿桿菌 基因表達 酶學性質
摘要：龍膽酸是芳香族化合物微生物降解的核心代謝產物,龍膽酸降解研究對于芳香族化合物的降解研究具有重要意義。龍膽酸1,2-雙加氧酶是催化龍膽酸降解的關鍵酶。本研究利用雙加氧酶催化保守結構域在產堿桿菌P156的基因組上通過多序列比對找到一個龍膽酸雙加氧酶基因gdoP;利用分子生物學技術對該基因進行異源表達;并利用重組蛋白對酶學性質和動力學參數進行測定。酶學性質研究表明,GdoP催化反應的最適pH為7.5,最適溫度為40℃。GdoP是一個Fe2+依賴型雙加氧酶,含有Fe2+離子結合結構域。Fe2+離子能夠明顯促進GdoP酶活,Cu2+、Cd2+離子對GdoP的酶活有明顯抑制。以龍膽酸為底物,GdoP的Km值和Vmax值分別為641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有較強的底物特異性,能夠催化龍膽酸開環生成3-馬來酰丙酮酸,不能催化5-氨基水楊酸、水楊酸和1-羥基-2-萘酸的轉化。本研究系統的研究了龍膽酸1,2-雙加氧酶GdoP的酶學性質,有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解過程。
青島農業大學學報·自然科學版雜志要求:
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