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雞源產氣莢膜梭菌重組酶聚合酶擴增檢測方法的建立
許笑; 王艷華; M; Umar; Zafar; Khan; 王恒; 蔡建平 中國農業科學院蘭州獸醫研究所; 家畜疫病病原生物學國家重點實驗室; 甘肅蘭州730046; 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心; 江蘇揚州225009
關鍵詞：產氣莢膜梭菌 重組酶聚合酶擴增技術 熒光定量檢測 雞壞死性腸炎
摘要：為建立雞源產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)的快速診斷方法,本研究以產氣莢膜梭菌α-毒素的編碼基因plc為基礎設計、合成引物和探針,并以real-time PCR的方法進行驗證,建立了雞源產氣莢膜梭菌的重組酶聚合酶擴增(RPA)檢測方法。該方法可在38℃、25 min內對產氣莢膜梭菌的α-毒素編碼序列進行快速特異性擴增,最低檢測限量可達1×10^1copies/μL,靈敏度良好。以此方法檢測實驗室保存的臨床樣本,其檢測結果與real-time PCR的檢測結果一致。上述結果表明,本研究建立的real-time RPA方法在檢測雞源產氣莢膜梭菌時具有操作簡單、快速靈敏的特點,適用于雞源產氣莢膜梭菌的臨床檢測。
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