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蘋果輪紋病菌(Botryosphaeria dothidea)果膠裂解酶基因Bdpl1的致病功能分析
洪坤奇; 趙瑩; 尹新明; 習慧君; 劉闖; 文才藝; 臧睿 河南農業大學植物保護學院菌物研究所; 鄭州450002; 河南農業大學植物保護學院植物病害生物防治研究中心; 鄭州450002
關鍵詞：蘋果輪紋病菌 果膠裂解酶 基因敲除
摘要：由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的蘋果輪紋病是影響我國蘋果安全生產的重大病害之一。因此,本研究基于受蘋果輪紋菌侵染的蘋果組織中果膠裂解酶基因Bdpl1表達上調這一現象,通過Split-marker PCR技術構建Bdpl1基因敲除載體,并通過PEG介導的原生質體轉化獲得轉化子,經常規PCR和qRT-PCR對所獲得的轉化子進行篩選,成功獲得1個Bdpl1基因缺失陽性突變子。該轉化子在PDA上的培養基性狀與野生型沒有明顯差異,但在果膠培養基上菌落直徑明顯小于野生型。其胞外果膠酶活相比野生型明顯下降,但在離體'早富'蘋果枝條上的致病力并沒有明顯的下降。通過qRT-PCR技術發現在基因Bdpl1敲除后,其家族內有3個基因在病菌侵染過程中相比野生型明顯上調表達(>3倍)。這些現象表明果膠裂解酶基因Bdpl1與病原菌的營養生長過程關系不大,但其參與對寄主果膠類物質的降解。Bdpl1基因對輪紋病菌致病力的影響較小,有可能是Bdpl1基因敲除后,該基因家族內其他基因的上調表達補償了Bdpl1基因的功能。
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